반대 갑상선 과산화효소 Elisa 테스트는 반대 TPO 항체 시험 키트를 장비를 답니다

안티-TPO 항갑상선 과산화효소 elisa 장비

1. 용도

인간 혈청에서 갑상선 과산화효소에 대한 항체의 시험관 내에서 정량적 결정을 위한 면역 분석법. 안티-TPO 확정은 자가 면역성갑상선질환의 진단에서 구호로서 사용됩니다.

2. 개요

• 갑상선 특이성 과산화효소 (TPO)는 싸이로사이트의 마이크로솜에 참석하고, 그것의 선단 세포 표면에 나타내집니다. 틸로글로불린 (Tg)와 시너지에서 이 효소는 갑상선 호르몬류 T4와 T3과 fT3을 형성하기 위해 l-티로신의 요오드화에서 필수적인 기능과 결과로 생기는 모노이오도티로신과 디요오도티로신의 화학적 커플링을 가지고 있습니다.
• TPO는 잠재적 자가 항원입니다. TPO에 대한 항체의 고상한 시럼 적정 농도는 갑상선염의 여러 형태로 자가면역에 의해 발생되었던게 발견됩니다. 스틸 사진은 TPO가 마이크로솜에 의해 초래된 자가면역에 아직 항원으로 확인되지 않았을 때 용어 미립체적 항체가 시간에서 발생한다는 것을 자주 알았습니다. 임상적 의미에서 2 조항 반대 TPO와 미립체적 항체는 싸이노니머스리 사용될 수 있습니다 ; 그러나 검사 방법에 관한 차이가 있습니다.
• 높은 안티-TPO 적정 농도는 만성적 하시모토병과 환자들의 최고 90 %에서 발견됩니다. 죽음의 질환에서, 환자들 중 70 %는 상승된 적정을 가지고 있습니다. 비록 절차의 민감도가 동시에 다른 갑상선 항체 (항-tg, TSH-수용기 항원 - 트라브)을 결정함으로써 증가될 수 있지만, 부정적 탐측은 자가면역질환의 가능성을 배제하지 않습니다. 항체가의 중요성은 질병의 임상적 활동과 관련되지 않습니다. 처음에 상승된 적정은 긴 앓았던 기간 뒤에 또는 송금 동안 부정적이게 될 수 있습니다. 항체가 다음과 같은 송금을 재현하면 퇴보는 있음직합니다.
• 반면에 일반적 미립체적 항체 검사는 정화되지 않은 마이크로솜을 항원 사전 준비로 사용합니다, 안티-TPO 시험이 정제된 과산화효소를 사용합니다. 2가지 절차는 있고 임상적 감도에 관한 비교 가능한 성능의 그러나 더 좋로트 대 로트 일관성과 더 높은 임상적 특이성이 사용된 항원의 더 높은 품질로 인해 안티-TPO 시험으로부터 기대될 수 있습니다. 효소 결합 면역 흡수 분석법 사용 인간 항원과 토끼 항-인체 igg 항체 (안티-igg).

3. 검사 원리

간접법, 분석의 총시간 : 70 분.

안티-TPO ELISA는 이단계 인큐베이션 절차에서 TPO에 항체의 탐지를 위해 고상, 간접적 엘리사법을 사용합니다. 폴리스티렌 마이크로웰 스트립은 대단히 면역 반응성 인간 TPO 항원으로 프리 코팅됩니다. 첫번째 인큐베이션 단계 동안, 안티-TPO 특정 항원은 존재할 경우 고상 사전 코팅한 TPO 항원과 인접될 것입니다. 웰은 매여있지 않는 혈청 단백을 제거하기 위해 씻겨지고 서양고추냉이 과산화효소 (HRP- 콘쥬게이트)에 컨쥬게이트된 토끼 항-인체 igg 항체 (안티-igg가) 추가됩니다. 두번째 인큐베이션 단계 동안, 이러한 hrp-복합 항체는 이전에 형성된 어떠한 안티겐 항독소(IgG) 복합체과도 인접되고 매여있지 않는 HRP-콘쥬게이트가 씻음으로써 그리고 나서 제거됩니다. 묶인 HRP가 파란색 상품에 결합시키는 항겐-항바디-안티-이그그 (HRP) 면역복합체, 무색인 색원체가 가수분해되는 과산화물이 그리고 웰에 추가되는 테트라메틸벤지딘 (TMB)와 요소를 포함하는 색원체 솔루션. 청색은 황산과 반응을 막는 것 뒤에 노랗게 변합니다.

색상의 농도의 양은 측정될 수 있고 그것이 각각 웰에서 캡쳐된 항체의 양과 표본에서 항체의 양에 비례합니다.

4. 시약 재료는 공급했습니다

오우 코팅된 마이크로플레이트, 8 Ｘ 12 스트립, 96 구멍. 인간 TPO 항원으로 사전 코팅합니다.

오우 교정부, 6개 물약병, 사용할 준비가 된 각각 1 mL ; 집중 : 0(A), 25(B),50(C), 100(D), 250(E)와 500(F) IU/mL.

오우 효소 접합체, 1개 물약병, BSA (보빈 세륨 알부민)을 포함하는 트리스-나크들 버퍼에서 HRP (서양고추냉이 과산화효소) 표지 토끼 안티 인간 igg 항체 (안티-igg)의 11.0 mL. 0.1% ProClin300 방부제를 포함합니다.

오우 혈청 희석액 : 1개 물약병, 11mL. 완충염과 염료를 포함하기

오우 세정 솔루션 정광, 1개 물약병, 25가지 밀리람베르트 (40X 집중된), pbs-트윈 워시 솔루션.

오우 기판, 1개 물약병, 사용할 준비가 된 11 밀리람베르트, (테트라메틸벤지딘) TMB.

오우 정지 용액, 1개 물약병, 1 mol / Ｌ 황산의 6.0 밀리람베르트.

1 카피인 오우 IFU.

오우 판 덮개 : 2개 부분.

재료는 요구했습니다 (그러나 제공되)

450nm과 620nm 사고 방식 흡수성 역량과 오우 미소 평판 해독기.

오우 마이크로플레이트 세탁기.

오우 인큐베이터.

오우 플레이트 교반기.

오우 마이크로피펫과 다중채널 마이크로피펫이 1.5%보다 더 좋정확성으로 50ul을 전달합니다.

오우 흡수지.

오우 증류수

5. 시험 절차

오우는 오직 웰의 수치만을 화날 각각 교정부와 표본을 위해 마이크로플레이트 웰을 요구했고 포맷시키 사용합니다.

오우는 잘 각각 교정부의 100 uL을 더합니다.

오우는 각각 잘 교정부 웰을 제외하기 위해 샘플 희석액의 100 uL을 추가합니다 (색을 녹색으로 만드세요).

각각 샘플 희석액 웰 (기록에 대한 샘플의 오우 에드 10 uL : 웰스에서 시약은 녹색으로부터) 청색을 돌리고 30 초를 흔들 것입니다.

플레이트와 플레이트가 37 30 분 동안 'Ｃ에 뚜껑을 덮고, 배양하는 오우 커버.

오우는 경사 또는 열망에 의해 마이크로판의 내용을 포기합니다. 가만히 따르면, 흡수지와 플레이트 건식을 타진하고 더럽히세요.

워시 솔루션의 오우 에드 350 uL이 (똑똑 두드리고 번지세요) 가만히 따르거나, 흡출합니다. 총 5 세정을 위해 4 추가 시간을 반복하세요. 세정의 끝에 흡수지 위에 플레이트를 뒤집고 어떠한 나머지 워시 솔루션도 툭툭 쳐서 보내세요.

효소 접합체의 오우 에드 100 uL,

플레이트와 플레이트가 37 30 분 동안 'Ｃ에 뚜껑을 덮고, 배양하는 오우 커버.

워시 솔루션의 오우 에드 350 uL이 (똑똑 두드리고 번지세요) 가만히 따르거나, 흡출합니다. 총 5 세정을 위해 4 추가 시간을 반복하세요. 세정의 끝에 흡수지 위에 플레이트를 뒤집고 어떠한 나머지 워시 솔루션도 툭툭 쳐서 보내세요.

오우는 잘 각각 기판의 100 uL을 더합니다. 커버되고 10 분간 동안 반응을 위해 어둠 속에서 대기 온도 (18-25C)에 잠복하세요. 서브스테이트 추가 뒤에 플레이트를 흔들지 마세요.

오우는 잘 각각 정지 용액의 50 uL을 더합니다.

웰 이내에 액체를 섞기 위한 15-20 초 동안 오우 쉐이크. 청색이 완전히 노랗게 되기 위해 변한다는 것을 보증하는 것이 중요합니다.

오우는 마이크로플레이트 리더에서 각각 잘 450 nm에 (단점을 잘 최소화하기 위해 620 내지 630 nm을 기준 파장으로 이용하는) 흡광도를 읽었습니다. 결과는 정지 용액을 추가하는 30 분 이내에 읽혀야 합니다.